一、使用前准备
器具清洗
将玻璃套管、研磨杵、配套密封盖全部取出,用清水冲洗,再用去污剂浸泡去除残留蛋白、组织残渣,冲洗干净后烘干备用。若用于微量生物样品,可提前用乙醇擦拭消毒,晾干后使用,避免杂质、微生物污染样品。检查玻璃部件有无裂纹、缺口,研磨杵与套管内壁贴合度良好,无明显卡顿、间隙过大情况,破损玻璃器具禁止使用。
样品分装
剪碎待处理组织,切成细小碎块,放入玻璃套管底部,按实验需求加入缓冲液、提取溶剂,液体总量不宜超过套管容积三分之二,防止研磨过程液体溢出。硬质、大块组织尽量提前剪至细碎,减少研磨阻力,避免用力过猛造成玻璃碎裂。
装配固定
将研磨杵缓慢插入套管内部,手持套管底部固定,搭配配套夹具将套管夹紧,防止研磨时套管滑动、倾倒;电动款匀浆器需将研磨杵上端连接电机夹持头,确认连接牢固。
二、研磨匀浆操作
手动研磨操作
一手稳固握住套管,另一手握住研磨杵手柄,垂直方向上下反复推拉研磨,推拉过程中缓慢旋转研磨杵,让样品充分与玻璃内壁摩擦、剪切。力度轻柔均匀,不要大力猛压,防止玻璃管壁受压开裂。每研磨数十次后,短暂提起研磨杵,让底部样品重新分散,避免局部物料堆积研磨不充分,反复操作至组织破碎、液体呈均匀混悬状态。
电动研磨操作
低速启动电机,研磨杵低速上下往复运动,根据组织软硬程度调节转速;硬质组织采用低速多次研磨,软质细胞样品可适当提高转速。研磨过程留意套管内液体状态,若出现大量泡沫可降低转速,防止样品蛋白变性;全程手扶套管固定,避免高速震动导致套管脱落。
研磨程度判断
肉眼观察无明显组织碎块,液体质地均匀细腻,无肉眼可见固体颗粒,即为研磨完成;若需要超细匀浆,可延长研磨时间,增加往复研磨次数。
三、取样与分离
研磨完成后停止操作,缓慢提起研磨杵,用少量缓冲液冲洗研磨杵外壁附着的样品,洗液并入套管内混匀。将匀浆液体转移至离心管、收集管中,按需进行离心、提取、检测等后续操作,套管底部残留未破碎的组织残渣可舍弃。
四、使用后清洗与存放
即时清洗
使用完毕立刻清洗,避免样品干涸粘附在玻璃内壁难以清理。先用配套溶剂浸泡溶解残留样品,清水反复冲洗,顽固附着物可用软毛刷轻刷管壁,禁止硬质金属刷刮擦玻璃,防止内壁产生划痕影响后续研磨效果。
干燥收纳
清洗干净后倒置沥干水分,放入烘箱低温烘干或自然晾干,干燥后将研磨杵放入套管内,配套放置于专用支架,避免玻璃部件相互磕碰产生破损。长期不用时,存放于干燥无尘环境,防止落灰污染。
五、操作注意事项
全程轻拿轻放玻璃部件,避免碰撞、跌落,研磨时禁止单侧用力挤压管壁;
研磨液体温度不宜过高,高温易造成目标组分失活,热敏样品可提前将器具预冷;
研磨过程若玻璃出现裂痕、液体渗漏,立即停止操作,更换器具;
不同样品处理之间必须清洗器具,防止交叉污染;
电动款运行时,不要用手触碰旋转研磨杵,避免划伤。